葉綠體色素的提取及其分離方法

層析液通過毛細作用擴散到色素線上時將色素溶解在層析液中，它們的溶解度是不一樣的，層析液在紙上繼續(xù)向前擴散的時候，會不斷揮發(fā)，因此其溶劑量會不斷減少，那么溶解度低的色素就會首先被析出呈現在紙上，而溶解度高的隨著層析液繼續(xù)往前擴散，在前面一點的地方析出。
至于為什么不會在相隔的兩條帶之間有色素，是因為層析液是緩慢減少的，而每一種色素其析出的濃度只有一個，所以只會形成一條帶。
你可以這么理解，層析液就像一輛公交車，在起點站載上了4種色素，每一種色素只能根據其自身性質在某一個站下車，所以走過的痕跡中只有剛好達到某種色素析出的條件時才會析出沉淀到紙上。其他的地方層析液走過的時候確實帶著色素，但是色素這個時候處于可溶狀態(tài)，并不會在紙上留下痕跡。

1. 葉綠體色素的提取

（1） 取菠菜或其他植物新鮮葉片4-5片（2g左右），洗凈，擦干，去掉中脈剪碎，放入研缽中。

（2） 研缽中加入少量石英砂及碳酸鈣粉，加2-3ml 95%乙醇，研磨至糊狀，再加10-15ml 95%乙醇，離心35min，提取上清液過濾于三角瓶中，殘渣用10ml 95%乙醇沖洗，一同過濾于三角瓶中。

（3） 如無新鮮葉片，也可用事先制好的葉干粉提取。取新鮮葉片（以菠菜葉），先用105℃殺青，再在80℃下烘干，研成粉末，密閉儲存。用時稱葉粉2g放入小燒杯中，加95%乙醇20-30ml 浸提，并隨時攪動。待乙醇呈深綠色時，濾出浸提液備用。

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2. 葉綠體色素的分離

（1） 取圓形定性濾紙一張（直徑11cm），將其剪成濾紙條（9cm×3cm），用滴管吸取乙醇葉綠體色素提取液，沿紙條的長度方向涂在紙條的一邊（距邊約1cm），使色素擴散的寬度限制在0.5cm以內，風干后，再重復操作數次。

（2） 在層析缸中加入適量的推動劑，將濾紙條帶有色素的一端插入層析缸中，使濾紙條下端浸入推動劑中。迅速蓋好層析缸蓋。此時，推動劑借毛細管引力順濾紙條向上擴散，并把葉綠體色素向上推動，不久即可看到各種色素的條帶。

（3） 當推動劑前沿接近濾紙邊緣時，取出濾紙，風干，即可看到分離的各種色素：葉綠素a為藍綠色，葉綠素b為黃綠色，葉黃素為鮮黃色，胡蘿卜素為橙黃色。用鉛筆標出各種色素的位置和名稱。

由上面的原理知道,在紙層析過程中,濾液細線中的色素是不會向下跑的,而是在毛細管拉力的作用下不斷向上跑,又因為不同的色素的分配系數不同,跑的距離也就不同.紙是用植物纖維做的,植物纖維里有毛細管,這是形成毛細拉力的先決條件,植物為什么可以將水分運送到高達數十米甚至數百米的樹頂,就是因為毛細管的拉力作用,制成紙后,這種拉力依然存在.